聚丙烯酰胺凝膠電泳色譜儀根據(jù)有無濃縮效應可分為連續(xù)凝膠電泳色譜儀和不連續(xù)凝膠電泳色譜儀。

一、連續(xù)凝膠電泳色譜儀：

采用相同孔徑的凝膠和相同的緩沖液（樣品緩沖液、凝膠緩沖液和電極緩沖液），在pH恒定和離子強度相同的條件下進行電泳。

1、分離效應：

主要靠電荷效應和分子篩效應實現(xiàn)分離。

2、特點：

（1）優(yōu)點：

1）制膠簡單，快捷。

2）緩沖液pH恒定，可防止樣品進膠后因pH改變而發(fā)生的凝聚和沉淀。

3）緩沖液組成簡單，來源廣泛。

（2）缺點：

分辨率不高。

二、不連續(xù)凝膠電泳色譜儀：

采用不同孔徑的凝膠和不同的緩沖液，在電泳過程中，由于濃縮膠的堆積作用，使樣品在濃縮膠和分離膠界面上先濃縮成一條窄帶，然后在一定濃度或濃度梯度的分離膠上進行分離。

1、系統(tǒng)的不連續(xù)性表現(xiàn)：

（1）凝膠系統(tǒng)的不連續(xù)性：

1）上層為大孔徑的濃縮膠。

2）下層為小孔徑的分離膠。

（2）緩沖液離子組成和各層縮膠pH的不連續(xù)性：

1）電極緩沖液為pH = 8.3的Tris－甘氨酸緩沖液。

2）濃縮膠緩沖液為pH = 6.8的Tris－HCl緩沖液。

3）分離膠緩沖液為pH = 8.9的Tris－HCl緩沖液。

（3）電位梯度的不連續(xù)性：

在電場中形成不連續(xù)的電位梯度。

2、分離效應：

在不連續(xù)凝膠電泳中存在三種物理效應，即樣品的濃縮效應、凝膠的分子篩效應和電荷效應。這三種效應同時存在，對蛋白質(zhì)樣品起協(xié)同作用，使樣品各組分根據(jù)帶電量、分子質(zhì)量和形狀按一定的順序分離。

（1）濃縮效應：

使樣品在濃縮膠中濃縮成一條窄帶，然后進入分離膠進行分離。

（2）分子篩效應：

大小和形狀不同的樣品通過一定孔徑的分離膠時，受阻滯的程度不同而遷移率不同。

（3）電荷效應：

在分離膠中，蛋白質(zhì)表面凈電荷不同，遷移率不同。

3、特點：

（1）分辨率高。

（2）適用于復雜和特殊樣品的分離。

   

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